La Reacción en Cadena de la Polimerasa.
En 1993, Kary Mullis recibió el Premio Nobel por inventar la Reacción en Cadena de la Polimerasa, también conocida como PCR. Este procedimiento para realizar miles de millones de copias de ADN ha revolucionado la biología moderna y se ha convertido en una técnica estándar para cualquiera que esté estudiando ADN. Con el PCR, secuencias específicas de ADN de muy pequeñas cantidades de muestra de ADN pueden ser amplificadas para realizar pruebas y análisis.
El procedimiento hace uso de las propiedades físicas del ADN. A temperaturas elevadas (alrededor de 95oC), las dos hebras de la hélice de ADN se desenrollan y separan. Las hebras separadas luego sirven como plantillas para la formación de nuevas moléculas de ADN. En una molécula de ADN de doble hebra, la base adenina (A) se empareja con la timina (T) y la guanina (G) se empareja con citosina (C). En una solución que contiene las hebras simples y las bases individuales, las bases complementarias se adherirán a las bases encontradas en las hebras simples.
Existen cinco componentes esenciales de una reacción PCR:
- Plantilla de ADN–El ADN que haya sido liberado de la fuente, por ej. Hisopo bucal, y purificada.
- Primers–Pequeños pedazos de ADN de hebra simple que se adhieren a las secuencias complementarias objetivo en las moléculas de ADN.
- Bases–las bases libres (A,T,G,C) que son añadidas al primer, extendiendo la secuencia complementaria para formar un ADN de dobre hebra.
- ADN Polimerasa–una enzima que facilita la extensión de la molécula de ADN.
- Buffer–la solución que mantiene las condiciones favorables en las que el PCR se lleva a cabo.
Todos los ingredientes anteriores forman la mezcla de PCR, la cual es luego colocada en un ciclador termal. El ciclador termal calienta y enfría la mezcla de PCR de la siguiente forma:
95oC Las hebras de ADN se separan (o desnaturalizar).
60oC Los Primers se adhieren a las hebras simples.
72oC El ADN polimerasa extiende los primers utilizando las bases libres.
Cada ciclo es repetido 25-35 veces. Después del primer ciclo, dos copias son producidas de cada plantilla de ADN. Los productos de PCR se multiplican exponencialmente a través de 30 o más ciclos, hasta que hayan cerca de un mil millón de copias de cada secuencia objetivo. Dado que la muestra de ADN típicamente contiene más de una copia de la plantilla de ADN, miles de millones de copias de la secuencia objetivo se producen. |
